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灵芝菌种分离:孢子分离法介绍

2020-5-8 23:10| 发布者: 食芝不倦| 查看: 92| 评论: 0

摘要:   为获得单一的、纯度高的灵芝菌种,就需要通过生物学手段,将灵芝从混杂的微生物群中分离出来。   灵芝菌种孢子分离法   从灵芝子实体中收集成熟的有性担孢子,并将其培养萌发成纯菌丝的方法。由孢子分离得 ...

  为获得单一的、纯度高的灵芝菌种,就需要通过生物学手段,将灵芝从混杂的微生物群中分离出来。



灵芝菌种分离:孢子分离法介绍 

  灵芝菌种孢子分离法

  从灵芝子实体中收集成熟的有性担孢子,并将其培养萌发成纯菌丝的方法。由孢子分离得到的菌丝具有菌龄短、生活力强,同时有性孢子具有双亲的遗传特性,是选育新菌株和杂交育种的材料。

  1.孢子的采集:以赤芝为例,选取个体典型、菌盖呈红褐色、有光泽、发育成熟、无白色生长圈,瓶(袋)上见有少量散落孢子粉,大小适中,无病虫害的子实体,切去菌柄,用棉球蘸取0.1%升汞溶液,反复擦拭菌盖正反面,菌孔一面宜轻,然后用无菌水充分冲洗,并以无菌纱布吸干水分。孢子采集方法有以下几种。

  (1)弹射法:在无菌条件下,用灼烧后的粗注射针将切去灵芝菌柄处钻1个深达菌肉的小孔,插在培养皿的铁丝架上,培养皿放在铺有纱布的搪瓷盆内,外罩上钟罩或无底蘑菇瓶,置28~30℃相对湿度90%的条件下培养。当有大量褐色孢子落入培养皿后,除去钟罩及支架,将培养皿盖好,并用透明胶带封贴或无菌纸包扎备用。所用器材均需事先用纸包扎灭菌并进行无菌操作。

  (2)贴附法:锥形瓶(即三角烧瓶)内分装入1厘米厚的PDA培养基,加棉塞灭菌,冷却成平板。无菌条件下将去柄的子实体如上述作表面消毒处理,放在无菌纸上,沿菌管方向切若干个小块,然后拔出锥形瓶塞,将子实体小块的皮壳部蘸上胶水粘贴在棉花塞底部,塞回锥形瓶口上。置28~30℃下培养,见有棕色孢子下落在培养基表面,即可在无菌条件下除去棉塞上的菌块。

  贴附法也可粘贴在试管斜面正上方的管壁上。若菌盖厚可削去部分皮壳和菌肉,见斜面上散落有孢子时,除去菌块。



灵芝菌种分离:孢子分离法介绍 

  2.菌丝培养:在无菌条件下,把弹射法收集到的孢子,用接种环蘸取少许抖落在斜面上,或将孢子少许放入试管内无菌水中(采用20%灵芝子实体煮汁更理想)制成孢子悬液,然后蘸涂在斜面或平板上,置28~30℃下培养。贴附法在平板或斜面上接收的孢子,可直接适温下培养,约1周,待孢子萌发后,挑取萌发早、长势旺的菌落,移接至新斜面上,经培养即为母种。

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