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灵芝菌种分离:分离物的提纯法介绍

2020-5-9 01:05| 发布者: 食芝不倦| 查看: 119| 评论: 0

摘要:   为获得单一的、纯度高的灵芝菌种,就需要通过生物学手段,将灵芝从混杂的微生物群中分离出来。   灵芝菌种分离物的提纯方法   分离、培养过程中难免带入杂菌,因此必须对分离物进行提纯。通常采用药物或生 ...

  为获得单一的、纯度高的灵芝菌种,就需要通过生物学手段,将灵芝从混杂的微生物群中分离出来。



灵芝菌种分离:分离物的提纯法介绍 

  灵芝菌种分离物的提纯方法

  分离、培养过程中难免带入杂菌,因此必须对分离物进行提纯。通常采用药物或生物技术将污染物排除。



灵芝菌种分离:分离物的提纯法介绍 

  灵芝菌种菌丝的提纯方法

  分离获得菌丝,与转接到斜面或平板上后,有时会出现菌落边缘不整齐,色泽不一致或基质内分泌的色素不均一等,这是菌种不纯的表现,务必进行提纯。方法是,将斜面或平板上具有灵芝特征和生长速度较一致的菌落,用锋利的接种刀取先端菌丝移接至新的斜面或平板上,如此反复多次,获得纯菌丝。



灵芝菌种分离:分离物的提纯法介绍 

  灵芝菌种细菌污染的排除

  锥形瓶内配制入PDA培养基加棉塞,0.103兆帕灭菌30分钟,在无菌条件下冷却近50℃,每升培养基内加入40毫克链霉素或金霉素,迅速分装入无菌试管或培养皿内制成斜面或平板备用。

  1、覆盖除菌法:从污染的灵芝菌种内挑取少许菌丝体移接入上述具抑菌剂的PDA斜面或平梅培养基上,23~25℃下遮光培养,此温度下灵芝菌丝能正常生长,而细菌生长极慢。见菌丝生长蔓延后,再取1支具抑菌剂的斜面,加热溶化,并冷却至50℃左右,倒入上面已长灵芝菌丝的斜面或平板上,厚约2毫米,凝固后再放在上述温度下培养。这样,灵芝菌丝可穿过覆盖的培养基生长,而细菌被阻隔在新加培养基的下面,然后挑取先端菌丝转管培养即能提纯。

  2、木屑滤菌法:将试管截去底,管内装少量木屑培养基两端加棉塞。灭菌、冷却,从一端接入被细菌污染的菌种1小块,23~25℃下遮光培养。灵芝菌丝能向木屑深处延伸,直至另一端。而细菌生长很慢,同时不能分解木屑而被阻留,可从另一端挑取灵芝菌丝进行转管。



灵芝菌种分离:分离物的提纯法介绍 

  灵芝菌种霉菌污染的排除方法

  这里主要指操作不当带入霉菌,引起污染的排除方法。

  1、覆盖抑菌法:斜面或平板上发现霉菌菌落时,用1块比菌落稍大的滤纸,蘸取0.5%多菌灵溶液覆盖在霉菌菌落上,抑制霉菌生长,而灵芝菌丝继续生长。然后,挑取先端菌丝转管纯化。

  2、药物滤菌法:跟上述细菌木屑滤菌法操作相似,在木屑麸糠培养基内添加0.5%多菌灵,分装入无底试管内,两端加棉塞,灭菌后于一端接人带霉菌的分离物,28℃下遮光培养。因多菌灵对霉菌有较强的抑制作用,而对灵芝菌丝生长影响不大,当灵芝菌丝生长至另一端时即可转管纯化。

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